유세포 분석 2번째 글

Forward and side (orthogonal) scatter에 대해서 알아보겠습니다. 유세포 분석에서 세포들은 형광색소를 붙인 단클론 항체가 결합하는데 이것은 직접 특정한 표면이나 세포내 또는 핵 항원에 결합합니다. 세포 고유의 물리적 특성, 특히 크기나 세포내 과립성이 형광물질로 표지된 세포들이 레이저 빛을 통과 할 때 형광색소가 발산됨과 동시에 측정됩니다. 측방산란 (SCC; right angle/orthogonal light scatter) 은 세포질의 과립성에 상관관계가 있습니다.  무과립 세포질세포 (i.e. 림프구,그림1.1 낮은 SCC, 반면에 과립 세포질 세포 (i.e. 호중구, hypergranular promyelocytes) 는 높은 SCC에 나타납니다.  전방산란 (forward scatter; FSC) 는 세포 크기와 연관되어 있습니다.  큰 세포들은 좀 더 작은 세포들과 비교 했을 때 높은 FSC를 나타냅니다.

Flow cytometry of peripheral blood and bone marrow-gating strategy란 무엇일까요? 측방산란 (SCC;orthogonal light scatter) 에서 CD45 표현은 골수의 주된 세포 계열을 구분하는데 간단하고 재현 가능한 방법을 제공합니다. 골수나 말초혈액에서 이 방법을 통한 패턴과 gating하는 전략을 보여줍니다. CD45 염색의 강도 (X축) 과 측방산란(SCC, Y축) 을 바탕으로 정상 골수의 여러 가지 주된 집단들을 구분할 수 있습니다. 림프구(bright CD45 그리고 low SCC:red), 단핵구 (bright CD45 그리고 increase SCC: blue), 과립구 (moderate CD45 그리고 high SCC:gray). 적혈구의 대부분과 그것의 전구세포들은 용해과정을 통해 제거됩니다. 유핵 적혈구 전구세포들은 낮은 측방산란, CD45 음성, CD71 bright 인 위치에 나타납니다. CD45와 SCC에서 종양의 위치를 보여줍니다.  데이터를 얻고 난 후, 각각의 집단은 특정한 마커에 의해 분석된다. (e,g. 림프구는 B cell clonality와 pan T antigen expression 으로 분석되고, leukemic blast 는 CD45 반응성이 약하고 SCC상에 낮은 부분에 위치한 세포가 분석 됩니다. Etc).  유세포 데이터 분석은 ungated 화면이 항상 포함되어 있어야 하고, 또한 전형적인 CD45, 측방산란 상의 양상과 다른 비정상 세포집단이 빠지지 않도록 해야 합니다.
  양성 림프구나 B-CLL/Small lymphocytic lymphoma(SLL), T-large granular lymphocyte (T-LGL) leukemia 그리고 follicular lymphoma (FL)를 포함한 대부분의 mature (peripheral) lymphoproliferative disorder는 bright CD45 와 low SSC를 나타냅니다. 양성이나 종양적 단핵구는 (chronic myelomonocytic leukemia and acute monoblastic leukemia) bright CD45, 하지만 SSC는 림프구보다 높은 곳에 위치합니다. Hairy cell leukemia에서도 유사한 분포를 보입니다. 종종 myelodysplastic syndrom (MDS) 에서 과립구의 두드러진 형성의 이상 (과립이상)으로 SSC가 현저하게 감소하여 '단핵구' 위치에 나타나는 경우가 있습니다. 정상 B-세포 전구세포 (hematogon) 는 아주 낮은 SSC와 정상 림프구보다 약한 CD45 반응성을 보입니다.  Blast는 대게 moderate CD45와 SSC 약간 증가된 곳에 나타납니다. Precursor B and T-lymphoblastic leukemias, blastic natural killar (NK) -cell lymphoma/leukemia (DC2 acute leukemia), 그리고  B-and T-cell lymhomas (대부분 large cell type)는 'blastic' gate 에서 종양세포와 비슷한 위치에 나타납니다. 형질세포는 대부분 CD45-, SSC 낮은 곳에 나타납니다. 유핵 적혈구 전구세포와 비슷한 특성을 보입니다.  비혈액 종양 세포 (e.g. small cell carcinoma)는 대부분 CD45-와 SCC 높은 곳에 보입니다 ("metastatic"gate). 종종 형질세포종양도 이 위치에 나타납니다.  과립구/성숙한 골수계 세포는 moderate CD45 와 높은 SSC 를 나타냅니다.  Hypergranular acute promyelocytic luekemia, mast cells, 그리고 드물게 acute myeloid leukemia 에서 유사한 SSC 특성이 나타납니다.