* Optochin (P disk) susceptibility test
목적
미생물에 대한 optochin (ethylhydrocupreine hydrochloride)의 영향을 알아보기 위한 검사입니다.
Optochin 은 pneumococci를 용해하며 (양성), 다른 alpha-streptocci는 내성이 있습니다 (음성).
쉽게 말해서 폐렴구균(폐렴사슬알균, Streptococcus pneumoniae) 검사입니다.
원리
Optochin은 미생물의 ATPase와 ATP 생성을 방해하는 항생제입니다.
Optochin-impregnated disk (TaxoP)를 미생물이 자라도록 해 놓은 BAP (Blood agar plate) 배지 위에 놓아서 항생물질이 배지로 확산되게 합니다.
항생물질은 감수성이 있는 미생물의 성장을 억제하여, disk 둘레로 clearing, zone of inhibition (억제대)가 생깁니다.
14~16mm이면 감수성이 있는 것으로 판단하고 S. pneumoniae로 추정 동정할 수 있습니다.
방법
1) 루프(inoculating loop)로, pure culture의 2~3개의 의심되는 colony (집락)를 5% BAP에 streaking 합니다.
2) Optochin disk를 heated forceps를 통해 streaked are의 upper third에 놓습니다. Disk가 agar 표면에 잘 접촉하도록 disk를 부드럽게 누릅니다(tap).
3) 35℃, 5% CO2에서 18~24시간동안 incubation (배양)합니다.
* Culture는 ambient air에서만큼 잘 자라지 않고, 더 큰 억제대가 생깁니다.
4) 억제대(zone of inhibition) 길이를 측정합니다. (disk의 지름 포함)
결과
양성: 억제대 최소 14mm (6mm disk 사용 시)
음성: 억제대 없음
A. Streptococcus pneumoniae인 경우 억제대(zone of inhibition)가 14mm 이상이다.
B. Streptococcus pneumoniae가 아닌 Alpha-hemolytic Streptococcus spp.가 disk 근처까지 자란 모습이다.
한계점
Equivocal: 14mm 미만의 억제대 à questionable for pneumococci
Positive bile-solubility test이면 pneumococcus 확진
정도관리
양성: S. pneumonia (ATCC6305)
음성: S. pyogenes (ATCC12384)
Reference
Bailey & Scott's Diagnostic Microbiology Chapter 14
